病毒载体下游工艺流程
一级澄清
含病毒载体的原始培养基经过深层过滤或者离心与深层组合过滤,以去除大分子杂质和其他污染物。
二级澄清
经过一级澄清过滤的培养基采取额外步骤进一步纯化。
超滤/洗滤
超滤和洗滤分别用于产品浓缩和缓冲液交换。使用基于尺寸的过滤方法将病毒载体从杂质中分离。洗滤是将盐分和其他大分子杂质去除,代之以所选的缓冲液。
色谱
至少有两种层析方法被用于纯化病毒载体,包括离子交换、亲和与分子排阻层析。
病毒过滤
使用15纳米孔径的纳米过滤器对经过纯化的病毒载体进一步过滤,以去除外源病毒、内毒素及其他残余杂质和聚集体。
无菌过滤
在此过程中,可以多次进行无菌过滤或生物负荷降低。料液流经一个0.4或0.2微米的灭菌级过滤器,以去除细菌和其他加工过程中引入的微生物。
制成品灌装
将经过纯化和灭菌的病毒载体装入最终的预定容器。这里需要对试剂、包装材料和存储条件等方面考虑周全,确保产品的稳定性和完整性。
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