biological source
Escherichia coli (BL 21/pSR3)
assay
100% (SDS-PAGE)
form
solution
specific activity
≥20 U/μL
mol wt
96 kDa (Single polypeptide chain)
packaging
pkg of 1,000 U (10810274001), pkg of 5,000 U (11487671001)
manufacturer/tradename
Roche
technique(s)
DNA sequencing: suitable, Northern blotting: suitable, Southern blotting: suitable
color
colorless
pH
~7.9 (39 °F)
solubility
water: miscible
suitability
suitable for molecular biology
UniProt accession no.
application(s)
genomic analysis
life science and biopharma
foreign activity
Endonucleases, none detected (up to 30U using Lamda-DNA), Endonucleases, none detected (upto 30U using MWM III-DNA ), Nicking activity, none detected (up to 30U using pBR322-DNA), RNase, none detected (up to 30U using MS II- RNA )
storage temp.
−20°C
Gene Information
Escherichia coli ... rpoB(948488)
General description
利用该系统能够获得均匀标记的单链RNA。转录物可以用生物素或DIG-11-UTP标记，或者使用[α-32P]或[α-35S]标记的核苷酸进行放射性标记，以获得高比活性。
内容物：
内容物：
- SP6 RNA聚合酶，≥20 U/μl，溶于缓冲液，pH 7.9
- 转录缓冲液，10倍浓缩
Application
SP6 RNA聚合酶能够以转录SP6启动子下游的克隆DNA为模板，转录合成相应的RNA。可以用标记的NTP进行合成，获得高度标记的RNA。合成的RNA可用于许多应用，包括：
- RNA或DNA印迹技术
- 原位 杂交
- RNA酶保护研究：由酶合成的转录物可用作前体RNA，以研究RNA剪接和加工。
- 在转录反应期间，通过在GTP或ATP上过量添加m7GpppG或m7GpppA而在 体外 合成加帽RNA。将得到的反义RNA引入细胞，可抑制相应基因的表达。
- 合成反义RNA探针
Biochem/physiol Actions
启动子特异性
SP6 RNA聚合酶具有极强的启动子特异性，仅转录噬菌体SP6 DNA或SP6启动子下游的克隆DNA（例如pSPTBM20；pSPTBM21）。
热灭活：通过加入 2 μl 0.2 M EDTA（pH 8.0）和/或加热至65℃来终止反应。
SP6 RNA聚合酶具有极强的启动子特异性，仅转录噬菌体SP6 DNA或SP6启动子下游的克隆DNA（例如pSPTBM20；pSPTBM21）。
热灭活：通过加入 2 μl 0.2 M EDTA（pH 8.0）和/或加热至65℃来终止反应。
Features and Benefits
杂交探针的合成： SP6 RNA聚合酶能够高效生产均匀标记的RNA。这种标记RNA可用作Southern、Northern和斑点印迹以及原位杂交的杂交探针。
合适的标记物：转录物可以用生物素-16-UTP、DIG-11-UTP或荧光素-12-UTP进行非放射性标记。还可以用 [a-32P]- 或[a-35S]-标记的核苷酸进行放射性标记，以获得高比活性。
注意：罗氏拥有10倍浓缩的RNA标记混合物，专为DIG-、生物素和荧光素标记而设计。这些混合物与SP6 RNA聚合酶配合良好。
合适的标记物：转录物可以用生物素-16-UTP、DIG-11-UTP或荧光素-12-UTP进行非放射性标记。还可以用 [a-32P]- 或[a-35S]-标记的核苷酸进行放射性标记，以获得高比活性。
注意：罗氏拥有10倍浓缩的RNA标记混合物，专为DIG-、生物素和荧光素标记而设计。这些混合物与SP6 RNA聚合酶配合良好。
Preparation Note
活化剂：BSA/精胺
保存于密闭容器内，置于干燥通风处
Analysis Note
测试缓冲液
40 mM Tris-HCl，pH 8.0 (+20°C)，6 mM MgCl2，10 mM二硫苏糖醇，2 mM亚精胺，pH约为8.0 (+20°C).
无核酸内切酶
1.将1 μgλDNA和SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无λDNA降解。
2.将1 μg λDNA的Eco RI/Hind III片段与SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表带型无变化。
无切割活性
将1 μg pBR322 DNA和SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无超螺旋结构解旋。
无RNA酶
将4 μg MS2 RNA和SP6 RNA聚合酶溶于50μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无MS2 RNA降解。
在转录分析中的性能
使用SP6/T7转录试剂盒（目录号10 999 644 001）对SP6 RNA聚合酶进行功能测试。使用0.5 μg pST18 neo DNA进行标准检测，用Eco RI酶切并使用50 mCi [alpha-32P] CTP, [400 Ci/mmol (15 TBq/mmol)]标记，20分钟内的掺入率给出>50%的输入放射性。
40 mM Tris-HCl，pH 8.0 (+20°C)，6 mM MgCl2，10 mM二硫苏糖醇，2 mM亚精胺，pH约为8.0 (+20°C).
无核酸内切酶
1.将1 μgλDNA和SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无λDNA降解。
2.将1 μg λDNA的Eco RI/Hind III片段与SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表带型无变化。
无切割活性
将1 μg pBR322 DNA和SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无超螺旋结构解旋。
无RNA酶
将4 μg MS2 RNA和SP6 RNA聚合酶溶于50μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无MS2 RNA降解。
在转录分析中的性能
使用SP6/T7转录试剂盒（目录号10 999 644 001）对SP6 RNA聚合酶进行功能测试。使用0.5 μg pST18 neo DNA进行标准检测，用Eco RI酶切并使用50 mCi [alpha-32P] CTP, [400 Ci/mmol (15 TBq/mmol)]标记，20分钟内的掺入率给出>50%的输入放射性。
Other Notes
一个酶活性单位是在+37°C下，在60分钟内向酸可沉淀的RNA产物中掺入1 nmol CMP所需的酶活性。
体积活性：≥20 U/μl
体积活性：≥20 U/μl
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
仅试剂盒组分
产品编号
说明
- SP6 RNA Polymerase, in buffer, pH 7.9 ≥20 U/μl
- Transcription Buffer 10x concentrated
signalword
Warning
hcodes
Hazard Classifications
Eye Irrit. 2
存储类别
12 - Non Combustible Liquids
wgk
WGK 1
flash_point_f
does not flash
flash_point_c
does not flash
法规信息
常规特殊物品
低风险生物材料
此项目有
Ezgi Hacisuleyman et al.
Nature structural & molecular biology, 21(2), 198-206 (2014-01-28)
RNA, including long noncoding RNA (lncRNA), is known to be an abundant and important structural component of the nuclear matrix. However, the molecular identities, functional roles and localization dynamics of lncRNAs that influence nuclear architecture remain poorly understood. Here, we
Adam D Langenbacher et al.
EvoDevo, 7, 9-9 (2016-04-14)
Germ cells are specified during early development and are responsible for generating gametes in the adult. After germ cells are specified, they typically migrate to a particular niche in the organism where they reside for the remainder of its lifetime.
Sonja Oberland et al.
Frontiers in cellular neuroscience, 9, 366-366 (2015-10-07)
Olfactory signals influence food intake in a variety of species. To maximize the chances of finding a source of calories, an animal's preference for fatty foods and triglycerides already becomes apparent during olfactory food search behavior. However, the molecular identity
全球贸易项目编号
| 货号 | GTIN |
|---|---|
| 10810274001 | 04061837684524 |
| 11487671001 | 04061838702951 |