Anti-Choline Acetyltransferase Antibody

从大鼠脑中纯化的胆碱乙酰基转移酶。

使用经验证可用于IH的抗胆碱乙酰基转移酶抗体，克隆1E6检测胆碱乙酰基转移酶。

免疫组化：1:100-1:250。参见下面的免疫组化程序。

最佳工作稀释度必须由最终用户进行确定。

MAB305，胆碱乙酰基转移酶的单克隆抗体的免疫组化程序（PAP技术）

I）灌注&切片程序

1.用含4%多聚甲醛的0.12 M磷酸盐缓冲液（pH值7.3）的固定液灌注心脏，用于光学显微镜检查（LM），此外，0.1%戊二醛和0.002%CaCl2用于电子显微镜检查（EM）。

2.取出大脑，并在4°C下于0.12 M磷酸盐缓冲液中的4%多聚甲醛中后缀2-18小时。

3.脑部封闭切片后，在数次更换的缓冲液中洗涤2-3小时。

4.将用于EM的标本在振动切片机（50 μm）上切片，并在缓冲液中冲洗，用于LM的标本应在缓冲液中的30%蔗糖中冷冻保护。

5.用干冰冷冻后，在低温恒温器上切下30-40 μm厚的LM标本切片。

6.冲洗切片，然后保存在含有0.1%叠氮化钠的磷酸盐缓冲液中。

II）染色程序

将组织在连续激搅拌的溶液中作为自由漂浮的切片进行处理。 除非另有说明，否则在室温下进行全部培养。

1.a.对于ChAT阳性体细胞和树突的定位：

仅在0.1 M Tris缓冲盐水（TBS；含1.4%NaCl，pH值7.3）中洗涤切片。 不使用去污剂或酶预处理。

b. 对于定位ChAT阳性末端样结构：

在TBS（pH值8.1）中于37°C培养切片5分钟。 将切片转移到含有链霉蛋白酶（1.2 μg/ml）的TBS（pH值8.1）中，在37°C下放置1 1/2-2分钟，然后用冰冷缓冲液洗涤几次，总共5分钟。 应评估每个检查区域的链霉蛋白酶浓度和消化培养时间。

c. 用于定位ChAT免疫反应性并随后对切片进行复染：

在含有0.1%-0.8%Triton X-100的TBS中培养15分钟可能会增加免疫试剂的组织渗透性，但也会增加背景染色。

2.将切片在正常山羊血清（3-5%）中培养1小时。 全部抗血清的工作溶液也应含有类似稀释的正常山羊血清。

3.在抗ChAT单克隆抗体溶液（建议的工作稀释度为1：250，最终工作稀释度必须由最终用户确定）中于室温下培养2小时，然后在4°C下再培养6-18小时。

4.培养用第二抗体（即山羊抗小鼠IgG，目录号AP124，稀释度1：50-100）进行1-2小时。

5.培养用稀释的PAP复合物（即小鼠PAP，目录号PAP14，浓度μ25-50 g/ml）进行1小时。

6.在缓冲液中漂洗后，每次40分钟至1小时重复第二抗体和PAP步骤，以放大染色强度，特别是小的含ChAT结构的染色强度。

7.与0.06%3，3′-二氨基联苯胺×4 HCl（DAB；用磷酸盐缓冲盐水，pH值7.3稀释）和0.006%H2O2反应15分钟。

8.常规LM的标本在0.005%OsO4（四氧化锇）中后固定1分钟，然后安装，脱水并盖玻片。 将被EM封闭的选定区域在2%OsO4中后固定1小时，用乙酸铀酰整体染色，然后平包埋在Epon-Araldite树脂中。

研究子类别
神经递质 & 受体

神经元 & 胶质标记

研究类别
神经科学

识别大脑和脊髓（CNS）中的胆碱能神经元。

不含防腐剂的腹水。

未纯化

自发运之日起在-20°C可保存1年。等分以避免反复冻融。为了最大程度地回收产品，在融化后和取下盖子之前，将原始样品瓶进行离心。

对照
脑组织

浓度：请参考批次特异性浓缩物的分析证书。

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