小分子HPLC

小分子分析

小分子特指低分子量化合物（通常小于900道尔顿）。常见小分子包括氨基酸、脂质、糖类、脂肪酸、生物碱等。

现有多种方法可供分离小分子，包括液相色谱(LC)、气相(GC)、薄层色谱(TLC) 和毛细管电泳(CE)。此外，还可通过磁共振波谱法(NMR)或质谱法(MS)等方法鉴定小分子。最近几年液相色谱-质谱联用分析(LC-MS)成为重要的小分子鉴定技术。

能否确保高效液相色谱HPLC、UHPLC或LC-MS获得理想的小分子分析结果，取决于是否选择了最适宜的固定相和流动相条件。分析物化学特性是决定最适宜的柱化学试剂选择的关键。而速度、样品基质和化合物含量等其他因素决定了最适宜的固定相基质材料。

小分子HPLC分析

小分子HPLC分析通常采用反相分离方式。极性化合物分离可选用亲水作用色谱(HILIC)和正相色谱，前者效果更佳。离子化合物分离可选用离子交换分离方式，有机阴离子或阳离子还可选用离子色谱法。

HPLC色谱柱可填充全孔二氧化硅颗粒、表面多孔颗粒、聚合物颗粒或以整体型硅棒作为固定相，也可使用氧化铝、氧化锆颗粒和碳颗粒。分离小分子时，固定相材料的典型孔径范围为60Å-160Å。HPLC固定相粒径通常为3µm至5µm范围，UHPLC粒径通常为2µm或更小。固定相可连接不同的柱选择性修饰。C18烷基链是反相(RP)色谱法中最常用的柱化学修饰。但其他修饰——如C30、C8、苯基、五氟苯基和广泛的极性更强的修饰以及具有离子交换或手性的修饰——几乎可以分离所有溶于液体的化合物。RP-HPLC的流动相通常含有水相缓冲液或水和水溶性有机溶剂，如乙腈或甲醇。

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